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細(xì)胞增殖及細(xì)胞活力檢測方法
2022-05-25
一、細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性細(xì)胞增殖是活細(xì)胞的重要?理功能之?，細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性檢測所用的方法相近，但實驗?zāi)康牟煌?。?xì)胞增殖是通過細(xì)胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)判斷細(xì)胞的數(shù)量變化，例如細(xì)胞計數(shù)法，反應(yīng)的就是細(xì)胞真實的數(shù)量。而細(xì)胞活性檢測，則是通過檢測細(xì)胞受到藥物或其他措施處理后，標(biāo)志物產(chǎn)量或濃度的變化，進(jìn)而判斷藥物或處理措施的作用，細(xì)胞活性檢測所得結(jié)論，往往反映了實驗設(shè)計的目的。細(xì)胞增殖檢測，因檢測標(biāo)志物的不同，目前大致分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度...
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蛋白保存方法，你知道多少
2022-05-24
生物大分子的貯藏保存可分為干態(tài)和液態(tài)貯藏兩種。蛋白質(zhì)失活受多種理化因素的影響，主要有空氣、溫度、水分、光線、酸堿度、樣品狀態(tài)、微生物活動、保存時間和容器等。這些因素可單獨起作用，但更多情況是協(xié)同作用?？偟膩碚f，蛋白質(zhì)的保存主要考慮其構(gòu)型穩(wěn)定、活性中心的保護(hù)、避免輔助因子喪失等，以防止其變性、解聚或降解。由于溫度和水分對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性影響很大，故蛋白質(zhì)最好是低溫、冷凍或冷凍干燥后低溫干燥保存。1.液態(tài)保存(1).在低溫下保存蛋白質(zhì)對熱敏感，溫度越高，穩(wěn)定性越差。因此，低溫保存蛋...
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牛血清白蛋白BSA在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用
2022-04-26
牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）是牛血清中的一種球蛋白，又稱第五組分（需要注意的是，第五組分并不是BSA的一種組份，而是EdwinJ.Cohn教授早期從血液中通過特定的分離技術(shù)得到5種組份，其中第五種就是白蛋白），CAS號為9048-46-8，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用，無免疫球蛋白IgG牛血清白蛋白產(chǎn)品血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用...
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介紹重組腸激酶的使用注意事項
2022-04-24
重組腸激酶（Enterokinase,lightchain）是一種高度專一性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的蛋白酶，在Lys的C端水解多肽。它可以將胰蛋白酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橐让?，也可以將帶有這個識別序列的融合蛋白切開。由于腸激酶具有高度專一性，水解效率高的特點，它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。腸激酶具有高度專一性，水解效率高的特點，它被廣泛地應(yīng)...
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細(xì)胞凍存液分類與選擇
2022-04-24
細(xì)胞凍存是細(xì)胞生物學(xué)研究及藥物研發(fā)細(xì)胞實驗中需要經(jīng)常面對的常規(guī)操作。隨著細(xì)胞越來越嬌，人工越來越貴，各種細(xì)胞凍存液應(yīng)運而生，如何從名目繁多的細(xì)胞凍存液中選擇變成一個問題。本文從細(xì)胞凍存液分類，應(yīng)用場景，使用效果等多方面加以闡釋，希望能對如何選擇細(xì)胞凍存液有所助益。一、細(xì)胞凍存液的分類從成分劃分（1）滲透性和非滲透性滲透性保護(hù)劑分子量小可滲透到細(xì)胞內(nèi)，如甘油、DMSO、乙二醇等，其在細(xì)胞冷凍存*凝固之前，滲入細(xì)胞內(nèi)，降低細(xì)胞內(nèi)外溶液中的電解質(zhì)濃度，阻止細(xì)胞內(nèi)水分外滲，避免細(xì)胞過...
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細(xì)胞凍存液原理及配制方法
2022-04-22
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中，及時凍...
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PEI轉(zhuǎn)染試劑是非常有潛力的非病毒質(zhì)粒載體試劑
2022-03-28
分子生物學(xué)的發(fā)展使得大量致病基因被鑒定，科學(xué)家在這些研究成果的基礎(chǔ)上發(fā)展了基因治療。基因治療是利用基因載體將治療基因?qū)牖颊唧w內(nèi)，進(jìn)而表達(dá)功能蛋白以達(dá)到治療的目的?；蛑委焸鬟fDNA面臨的挑戰(zhàn)之一是外源治療基因會被體液和胞外空間的核酸內(nèi)切酶降解。治療基因在目標(biāo)組織中的選擇性積累、細(xì)胞內(nèi)化以及從溶酶體逃逸這些問題對所有核酸治療劑都是需要克服的。DNA必須輸送至細(xì)胞核以允許獲得轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。因此，設(shè)計和制備安全高效的基因載體來壓縮并且保護(hù)治療基因以免被核酸內(nèi)切酶降解并延長其在體內(nèi)的...
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基因組DNA提取原理說明
2022-03-24
DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對象。所以基因組DNA提取實驗是分子生物學(xué)最基本實驗之一。今天若重介紹基因組DNA提取的原理。在接下來的時間了還會介紹動物基因組DNA的提取步驟。DNA.RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，它們的鈉鹽比游離酸易溶于水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達(dá)40g/L.DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中，DNA天然狀態(tài)的DNA是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細(xì)...
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