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蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶
2022-03-21
蛋白酶，顧名思義，降解蛋白的酶，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。在RNA提取中，蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶，防止RNA的降解。蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)，藥理學(xué)等科研方面。一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶，具有很高的比活性。一般儲存在-20°C，避光防潮密閉干燥蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類的統(tǒng)稱蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌中純化得到。該酶...
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介紹牛血清白蛋白常見的問題解決方法
2022-01-21
牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護(hù)或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數(shù)底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過1h時(shí)，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因?yàn)樵诓缓Ｑ灏椎鞍椎姆磻?yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時(shí)間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限...
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外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色
2022-01-07
外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破，要將其用于臨床治療，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)面臨很大的挑戰(zhàn)。外泌體（exosome）是細(xì)胞分泌囊泡（extracellularvesicles）的一種亞型，存在于生物體液中，并參與多種生理和病理過程。外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞間通信的一種新機(jī)制，允許細(xì)胞交換蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和遺傳物質(zhì)。過去，細(xì)胞分泌的外泌體一度被認(rèn)為只是參與廢物排泄；現(xiàn)在，隨著高通量蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)的發(fā)展，外泌體被廣泛認(rèn)為是生物體內(nèi)細(xì)胞間短距...
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介紹細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的幾種檢測方法
2021-11-28
細(xì)胞凋亡與壞死是兩種*不同的細(xì)胞凋亡形式，根據(jù)死亡細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別，可以將二者區(qū)別開來。細(xì)胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法。1、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡（1）未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。（2）染色細(xì)胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、...
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外泌體的提取主要包括以下幾種方式
2021-11-25
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載...
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蛋白酶K的配制標(biāo)準(zhǔn)及保存方法
2021-10-26
蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué),藥理學(xué)等科研方面.一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般儲存在-20°C,避光防潮密閉干燥。蛋白酶Ｋ主要應(yīng)用于基因檢測中基因抽取，是檢測試劑盒生產(chǎn)的重要原料，蛋白酶K產(chǎn)品由于在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而被廣泛應(yīng)用于制備脈沖電泳的染色體DNA，以及去除DNA和RNA中的核酸酶?，F(xiàn)有基因抽提及檢測試劑盒中均需配備該酶。蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)：20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinaseK)：將2...
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使用CCK-8要注意的事項(xiàng)有哪些
2021-10-25
CellCountingKit-8（簡稱CCK8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。相信做細(xì)胞的同學(xué)對他都很熟悉，你確定你使用CCK-8試劑的方式是*正確的嗎？使用CCK-8要注意的事項(xiàng)有哪些：1.酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。2.CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測定的過程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果。3.當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤...
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胎牛血清與新生牛血清在蛋白組成上的差異有哪些
2021-09-26
胎牛血清（FetalBovineSerum,FBS）是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候，通過心臟穿刺采取胎牛血獲取的血清，因其未與外界環(huán)境接觸，所以血清內(nèi)IgG等免疫因子相對含量較少，適合用于免疫類細(xì)胞的培養(yǎng)。胎牛血清與新生牛血清在蛋白組成上的差異還是很明顯的。首先，胎牛血清總蛋白含量（g/dl）約為2%-4%,新生牛血清約為3.0%-5.0%,成牛血清則高達(dá)8%-10%.從蛋白含量上也可以初步判斷一個(gè)血清是否為胎牛或新生牛血清，蛋白含量越高說明牛齡越大，目前檢測蛋白含量是初步檢測一項(xiàng)重...
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